Skip to content

Zmiany specyficzne dla kłębuszków ekspresji VEGF-A prowadzą do wyraźnych wrodzonych i nabytych chorób nerek ad 5

2 miesiące ago

839 words

Przy urodzeniu (P0), kapilarnie pętlowo-kłębuszkowe z heterozygotycznego VEGF-loxP + / p, Neph-Cre + / r. myszy wykazuje normalne poziomy ekspresji WT1 i VSMA, podczas gdy ekspresja VEGF jest konsekwentnie redukowana na poziomie mRNA w porównaniu z kontrolami typu dzikiego. (g. i) W wieku 9 tygodni heterozygotyczne myszy VEGF są klinicznie złe. W tym czasie większość kłębuszków nerkowych wykazuje całkowity brak markerów różnicowania podocytów (tj. Brak VEGF lub WT1, oba są nieobecne). W h można zidentyfikować pojedynczą komórkę pozytywną WT1 (strzałka). (i) VSMA zazwyczaj nie występuje w kłębuszkach w wieku 9 tygodni; jednakże okazjonalne komórki VSMA-dodatnie można również zidentyfikować i prawdopodobnie reprezentują. aktywowane. komórki mezangialne (strzałka). (j. l) W zerowym VEGF-loxP + / +, Neph-Cre + /. kłębuszki przy urodzeniu, nie obserwuje się VEGF w kłębuszkach, jak przewidywano z powodu wycięcia specyficznego dla podocytu obu alleli VEGF. WT1 występuje w zróżnicowanych podocytach. W przeciwieństwie do tego, VSMA jest nieobecny, wykazując defekt migracji i / lub różnicowania komórek mezangialnych w kłębuszek nerkowy. (m. o) U myszy VEGF-164 z nefryną a, zarówno VEGF, jak i WT1 ulegają ekspresji w podocytach obecnych w obrębie zwiniętych kłębuszków. VEGF jest znacząco podwyższony. Ponadto VSMA i komórki mezangialne są obecne, ale wydają się otaczać zwinięty kłębuszek w kształcie półksiężyca. Powiększenie: × 350. VEGF-A jest wymagany w podocytach do ustalenia bariery filtracyjnej kłębuszkowej. W celu zbadania fenotypu wynikającego z całkowitego braku VEGF-A w kłębuszku nerkowym, wygenerowano myszy, które były zerowe dla VEGF-A specyficznie w podocytzie (myszy VEGF-loxP + / +, Neph-Cre + / y) (n = 15). Te myszy urodziły się na oczekiwanej częstotliwości mendlowskiej, ale zmarły przy urodzeniu lub w ciągu 18 godzin od urodzenia. Niektóre z tych myszy urodziły się z obrzękami, które można zaobserwować u niemowląt z wrodzonym zespołem nerczycowym (22). Badanie pod mikroskopem świetlnym wykazało, że wszystkie puste kłębuszki VEGF-A były małe i nie zawierały rozróżnialnych kłębuszkowych pętli kapilarnych. Dodatkowo obecne były podocyty, ale miały tendencję do składania się w kilku warstwach i brakowało dobrze uformowanych szczelinowych szczelin, wyspecjalizowanych połączeń międzykomórkowych znalezionych pomiędzy procesami stóp (Figura 5a i dane nie pokazane). Figura 5 Kłębuszki puste od VEGF nie tworzą barier filtracyjnych ani fenestracji w komórkach śródbłonka. (a) Kłębuszek dziki (+ / +) (strzałka) ma koronkowy wygląd z powodu otwartych pętli kapilarnych. Kłębuszek pozbawiony VEGF (. /.) Nie rozwija się całkowicie i brakuje widocznych pętli kapilarnych. Powiększenie: × 350. (b) Barwienie immunohistochemiczne dla WT1 (zielony), marker dla komórek podocytów i PECAM (czerwony), marker dla komórek śródbłonka, pokazuje zmniejszoną liczbę komórek śródbłonka w niedojrzałych (kapilarnie pętlowych etapach) pustych w VEGF kłębuszkach. W dojrzałym kłębuszku nie pozostają komórki śródbłonka. Powiększenie: × 300. (c) Przenikanie EM bariery filtracyjnej w kłębuszku typu dzikiego (+ / +) wyraźnie pokazuje fenestrowany śródbłonek na późnym etapie pętli kapilarnej, podczas gdy nie obserwuje się fenestracji w komórkach śródbłonka (en) znalezionych w odpowiedniej późnej pętli kapilarnej. stadium kłębuszków pustych w VEGF. W dojrzałym kłębuszku pozbawionym VEGF widoczna jest błona podstawna (strzałka), ale brakuje komórek śródbłonka. Powiększenie: × 20 000. Przeprowadzono analizę immunohistochemiczną z przeciwciałem przeciwko PECAM, które rozpoznaje receptor powierzchniowy komórki na komórkach śródbłonka. Chociaż komórki śródbłonka były obecne w większości niedojrzałych kłębuszków, były one znacznie zmniejszone, a dojrzałe kłębuszki zupełnie nie miały komórek śródbłonka (Figura 5b). Sporządzono etykietowanie BrdU; wyznakowane komórki śródbłonka były łatwo identyfikowane w pęknięciach naczyniowych kłębuszków fazowego typu S typu dzikiego, ale nigdy nie były obserwowane w pustych kłębuszkach VEGF-A specyficznych dla podocytów (dane nie przedstawione). Badania EM wykazały powszechne, ale nie całkowite, zanikanie procesów podocytów (nie pokazano). W niektórych kłębuszkach można było zidentyfikować małe pętle kapilarne z GBM. Jednak ten GBM nie został zabezpieczony (dane niepokazane). Komórki śródbłonka obserwowano rzadko tylko w kłębuszkach z pętlą kapilarną i zawsze brakowało im szczudełek (Figura 5c). W przeciwieństwie do tego fenestracje można było łatwo zaobserwować w komórkach śródbłonka kłębuszków dzikiego typu kapilarnego typu dzikiego (Figura 5c). Pętle kapilarne w całkowicie zróżnicowanym (dojrzałym) kłębuszku wykazywały brak komórek śródbłonka (Figura 5c). Analiza in situ wykazała, że obecne podocyty odpowiednio eksprymowały markery różnicowania, w tym WT1 (Figura 4k), nefryna i podocin (dane nie przedstawione), chociaż VEGF-A był nieobecny z powodu genomowego wycięcia genu VEGF (Figura 4j). )
[hasła pokrewne: wiarygodny test internetu, badanie elektrofizjologiczne, ciekawe miejsca w czechach ]
[podobne: polskie towarzystwo ginekologiczne, nakładanie żelu na paznokcie, ciasta bezglutenowe przepisy ]