Skip to content

Zależna od MyD88 indukcja alergicznych odpowiedzi Th2 na antygen donosowy ad 9

2 miesiące ago

441 words

W doświadczeniach in vitro komórki płuc pobrano od niestymulowanych myszy i poddano ekspozycji na zmienne stężenia LPS przez noc (12. 24 godzin). Następnie komórki płuc poddano analizie FACS (BD Biosciences). Przygotowanie BMDC i uczulenie. BMDC hodowano zgodnie z wcześniejszym opisem (44). Pokrótce, komórki szpiku kostnego izolowano przez perfuzję kości udowej i piszczeli. Komórki hodowano w RPMI 1640 (Invitrogen Corp.) w obecności 1% supernatantu hodowli z linii komórkowej transfekowanej mysim genem GM-CSF. Pożywkę hodowlaną uzupełniono FCS, penicyliną, streptomycyną i L-glutaminą. Po 6 dniach komórki zebrano i poddano pulsacji za pomocą 100 .g / ml OVA zawierającego ng / ml LPS lub z różnymi stężeniami LPS przez noc. Myszy lekko znieczulano metoksyfluranem, a następnie podawano donosowo x 106 OVA pulsowanych BMDC w 50 ul PBS. BMDC poddano analizie FACS. Przygotowanie komórek otrzewnowych. Komórki otrzewnej uzyskano bez indukcji tioglikolanem. Do jamy otrzewnej dodano 5. 10 ml PBS. Wypełniony płynem wgłębienie delikatnie wstrząsano i usunięto płyn. Komórki przemyto i poddano analizie FACS. Analiza FACS. BMDC, komórki płuc i komórki otrzewnej zawieszono ponownie w PBS / 5% FCS zawierającym 0,01% azydku sodu. Komórki inkubowano z anty-FcR w połączeniu z mysim Ig przez 20 minut na lodzie. Komórki następnie wybarwiono przeciwciałami przeciwko CDllc, CD86, CD40, MHC klasy II, B220, Grl, A, NK, CD4, CD8 i kontroli izotypowej (BD Biosciences. Pharmingen) przez 30 minut na lodzie. Komórki analizowano za pomocą FACScan w połączeniu z oprogramowaniem CellQuest (BD Biosciences). Test ochrony przed RNazą. Komórki płuc zebrano od myszy 18 godzin po ekspozycji na PBS, 0,12 .g LPS i 10 .g oligonukleotydów CpG DNA. Komórki płuc zostały następnie poddane lizie w odczynniku TRIzol (GIBCO BRL, Invitrogen Corp.). Poziomy RNA cytokin analizowano za pomocą testu ochrony przed RNazą, stosując matrycę mCK-3b RiboQuant (BD Biosciences. Pharmingen) zgodnie z protokołem producenta. W każdej reakcji użyto pięć mikrogramów całkowitego RNA. Poziomy transkrypcji dla genu uspakajającego L32 zastosowano jako kontrolę dla równego obciążenia. Znaczenie statystyczne. Istotność statystyczną określono za pomocą testu ucznia. Podziękowania Autorzy pragną podziękować Patricii Ranney za pomoc techniczną. Prace te były wspierane przez granty NIH HL54450 i HL56389, a program szkolenia naukowców medycznych 5 T32 GM07205. SL Constant jest finansowany z dotacji American Heart Association. Przypisy Niestandardowe skróty: BAL, płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe; BMDC, DC pochodzący ze szpiku kostnego; OVA / LPS, OVA z niskim dawkowaniem LPS; TLR, receptor typu Toll-like; TLR4d, C.C3H-TLR4LPS-d; TRIF, domena zawierająca domenę TIR, indukująca IFN-y. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów.
[przypisy: crt p, przeciwwskazania do mikrodermabrazji, kardiolog blog ]
[więcej w: badanie elektrofizjologiczne serca, kardiolog blog, badania elektrofizjologiczne ]