Skip to content

Zależna od MyD88 indukcja alergicznych odpowiedzi Th2 na antygen donosowy ad 8

3 miesiące ago

737 words

Biorąc pod uwagę zwiększony potencjał nadmiernej stymulacji w tych miejscach, wymagana jest dokładniejsza kontrola odpowiedzi na bodźce antygenowe, w porównaniu z tymi w miejscach, które są mniej dostępne dla antygenów środowiskowych. Prawdopodobnie istnieje kilka poziomów kontroli w celu utrzymania homeostazy w tych miejscach, w tym utrzymania APC w stanie niedojrzałym, jak również aktywnych mechanizmów supresyjnych charakterystycznych dla wyspecjalizowanych mikrośrodowisk śluzówki, takich jak regulatorowe limfocyty T i cytokiny przeciwzapalne. Oba te mechanizmy utrzymania tolerancji obwodowej mogą być modulowane przez wrodzony układ odpornościowy, a w szczególności MyD88 (39, 40). Wrodzony układ odpornościowy najprawdopodobniej rozwinął się głównie w celu ochrony gospodarza po ekspozycji na zakaźną osobę. Główna rola cząsteczki adaptorowej TLR MyD88 w odporności płucnej Th2 sugeruje, że nieprawidłowe reakcje alergiczne za pośrednictwem Th2 prawdopodobnie wynikają z zarekwirowania wrodzonego układu odpornościowego, aby zakłócić naturalne mechanizmy homeostazy w tych miejscach. Zatem, ukierunkowanie na wrodzone mechanizmy kontroli adaptacyjnej odporności Th2 może mieć znaczący wpływ na łagodzenie stanów patologicznych zależnych od Th2, takich jak astma i alergia. Metody Zwierzęta. MyD88. /. myszy wytworzono jak opisano uprzednio (41) i uprzejmie dostarczono na podłożach BALB / c i B6 / 129 przez R. Medzhitov (Yale University School of Medicine). MyD88. /. myszy na podłożu BALB / c krzyżowano wstecznie co najmniej 6 razy przed użyciem. Myszy BALB / c i B6 / 129PF2 zakupione w The Jackson Laboratory zastosowano jako kontrole myszy KO odpowiednio na tle BALB / c i B6 / 129. Myszy TLR4d zakupiono również z The Jackson Laboratory. Myszy stosowano w wieku 6. 10 tygodni. Wszystkie badania na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Komitetu ds. Pielęgnacji i użytkowania zwierząt w Uniwersytecie Yale. Protokoły uczulania. W przypadku uczulenia donosowego myszy lekko znieczulono metoksyfluranem i poddano donosowemu dostarczeniu 100 .g białka OVA (stopień V, Sigma-Aldrich) w 50 .l PBS w dniach 0, i 2, jak opisano wcześniej (25). Dwa mikrogramy rekombinowanego TNF-a (R & D Systems Inc.) było współpodawane w dniu (Figura 2B). W celu uczulenia ip myszom wstrzyknięto 100 .g OVA w 2 mg wodorotlenku glinu (Pierce Chemical Co.), jak opisano wcześniej (17) lub 100 .g OVA w 200 .l PBS w dniach 0, i 2 w brak ałunu. W przypadku leczenia małą dawką LPS w każdym dniu uczulania stosowano 0,008 . 0,12 .g E. coli LPS O55: B5 (Sigma-Aldrich). W leczeniu wysokodawkowym LPS zastosowano 10. 40. L LPS. Protokół wyzwania. Dla wszystkich protokołów uwrażliwienia, myszy lekko znieczulano metoksyfluranem i prowokowano donosowo 25 .g OVA w 50 .l PBS w dniach 14, 15, 18 i 19 i uśmiercono w dniu 21. Analiza BAL. Płyn BAL uzyskano przez infuzję tchawicy 3 ml PBS, jak opisano wcześniej (42). Komórki BAL traktowano pożywką do lizy Rbc (1,6 g NH4CI, 0,2 g KHCO3 i 0,03 g EDTA) przez 5 minut. Komórki następnie przemyto, zliczono i odwirowano na szkiełkach. Preparaty barwiono H & E (Diff-Quik; Dade Behring Inc.), a różnicowe zliczenia komórek uzyskano na podstawie morfologii i charakterystyki barwienia. Detekcja przeciwciał w surowicy. Surowicę uzyskano przez nakłucie serca w dniu 21 w celu pomiaru specyficznych względem OVA przeciwciał IgE, IgG1 i IgG2a za pomocą ELISA, jak opisano wcześniej (25, 43). Norma IgE była dobrym prezentem E. Gelfanda (National Jewish Center for Immunology and Respiratory Medicine, Denver, Colorado, USA). Poziomy wykrywania wynosiły 5 ng / ml (IgE), 125 ng / ml (IgG1) i 81 U / ml (IgG2a). Produkcja cytokin w węzłach chłonnych. Komórki węzłów chłonnych śródpierścieniowych izolowano w dniu 21 po prowokacji i stymulowano in vitro 200 .g / ml OVA i syngenicznych splenocytów zubożonych w limfocyty T. Cytokiny w supernatantach hodowli mierzono za pomocą dostępnych w handlu zestawów ELISA (R & D Systems Inc.). Poziomy wykrywania wynosiły 25 pg / ml (IL-4), 125 pg / ml (IL-5) i 31,2 pg / ml (IL-13). Przygotowanie komórek płucnych. Myszom podawano donosowo 100 .g OVA z LPS w dniu 0 i uśmiercano w dniu 2. Płuca poddawano perfuzji 20 ml PBS przez prawą komorę. Całe płuca zostały odzyskane. Do zakłóceń fizycznych używaliśmy sita metalowego lub szkiełek. Do usunięcia szczątków użyto filtrów komórkowych. Filtracja komórek (BD Falcon, BD Biosciences. Discovery Labware) miała 100 .m średnicy. Zawiesiny komórek poddano wirowaniu na gradiencie Ficollu. W doświadczeniach trawienia fragmenty płuc inkubowano z 150 U / ml kolagenazy (CLS-1, Worthington Biochemical Corp.) i 20 ug / ml DNazy I typu I (Sigma-Aldrich) w 37 ° C przez 20 minut przed przerwaniem przez metalowe sito
[hasła pokrewne: badanie elektrofizjologiczne serca, crt kardiologia, badanie elektrofizjologiczne ]
[podobne: badanie elektrofizjologiczne, crt d, crt kardiologia ]