Skip to content

Ukierunkowana ekspresja dominującego negatywnego EGF-R w nerkach zmniejsza uszkodzenia kanalikowo-śródmiąższowe po uszkodzeniu nerek ad 7

2 miesiące ago

106 words

PRI indukował proliferację komórek kanalików (porównaj b z a), który został znacznie zredukowany przez ekspresję transgenu (porównaj c z b). (d. f) Czerwone zabarwienie Syriusza, 28 dni po niedokrwieniu. PRI indukował śródmiąższową akumulację kolagenu (porównaj e z d), która została znacznie zmniejszona przez ekspresję transgenu (porównaj f z e). × 200. Figura 6: Proliferacja komórek jajnikowych w kontrolnych (C) i po niedokrwiennych nerkach z myszy typu dzikiego (otwarte słupki) i transgenicznych (szare paski), 2, 4, 7, 14 i 28 dni po niedokrwieniu. Liczba komórek znakowanych PCNA, które znacznie wzrosły po niedokrwieniu, została zmniejszona przez ekspresję transgenu. Dane to środki. SEM. AANOVA, myszy transgeniczne versus typu dzikiego; P <0,05. Odkładanie kolagenu oceniano na nerkach po niedokrwieniu przy użyciu barwienia czerwienią Siriusa, obecnie stosowanej metody histologicznej do wykrywania tego białka. U zwierząt dzikich, 28 dni po zaznaczonym niedokrwieniem, odkładanie kolagenu wykryto w śródmiąższu otaczającym bliższe kanaliki i, w mniejszym stopniu, w kłębuszkach (Figura 5e). Zjawisko to zostało zredukowane przez ekspresję transgenu (Figura 5f). Kwantyfikacja odkładania kolagenu, przeprowadzona jak opisano w Metodach, wykazała, że 28 dni po niedokrwieniu, wynik obszarów zabarwionych na czerwono wynosił 1,93 plus lub minus 0,1 u zwierząt dzikich, podczas gdy osiągał jedynie 0,99 plus lub minus 0,1 u myszy transgenicznych ( P <0,005). Dyskusja Poprzednie prace sugerowały, że aktywacja EGF-R może odgrywać główną rolę w ewolucji uszkodzenia nerek (1, 2). W niniejszym badaniu ustalono linię transgenicznych myszy, które selektywnie eksprymowały w nerce dominujący negatywny mutant EGF-R pod kontrolą promotora. GT-1. Wykazaliśmy, że transgeniczne myszy, które miały normalną morfologię nerek i funkcję nerek w warunkach podstawowych, stały się odporne na rozwój zmian nerek po uszkodzeniu nerek. Efekt ten był związany ze zmniejszeniem proliferacji komórkowej w kanalikach, śródmiąższowym odkładaniem się zewnątrzkomórkowej matrycy i infiltracją komórek jednojądrzastych. Ponieważ w naszym modelu skrócone EGF-R ulega ekspresji wyłącznie w proksymalnych komórkach kanalików, wyniki te dostarczają dowodów na krzyżową wymianę między komórkami rurkowymi i śródmiąższowymi w uszkodzonych nerkach i pokazują, że rurowa aktywacja EGF-R jest kluczowym czynnikiem w tej interakcji. HERCD-533, skrócony EGF-R stosowany jako dominujący negatywny mutant w obecnym badaniu, pozbawiony jest większości domeny cytoplazmatycznej, w tym domeny kinazy tyrozynowej (38). Poprzednie badania (38, 42, 43) wykazały, że transfekcja tego mutanta w różnych typach komórek hamuje autofosforylację receptora, zmniejsza endocytozę receptora i degradację oraz zmniejsza jego mitogenne i onkogenne sygnały. Opisano również, że mutant ten ulega ekspresji in vivo w skórze, pod kontrolą promotora keratynowego i zachowuje się jak skuteczny mutant dominujący-negatywny (44). Zgodnie z oczekiwaniami, w niniejszym badaniu ukierunkowana nerkowa ekspresja mutanta HERCD-533 zmniejszyła fosforylację endogennego EGF-R w nerkach po infuzji EGF. W naszych badaniach, że ekspresja transgenu w proksymalnych kanalikach zmniejszała odsetek miejsc wiążących o wysokim powinowactwie i zwiększała dramatycznie gęstość receptorów o małym powinowactwie była uwzględniona w fakcie, że transgen ulegał nadmiernej ekspresji w stosunku do receptora endogennego typu dzikiego ( Rycina i 2) i zachowywały się jak dominujący negatywny mutant. Nasze dane są zgodne z wcześniejszymi badaniami in vitro (38, 43), które donoszą o podobnym działaniu, gdy komórki pozbawione endogennego EGF-R kotransfekowano zarówno z receptorami typu dzikiego, jak i zmutowanymi. Nasze prace dowodzą, że zjawisko to występuje in vivo i dlatego może być instrumentalne w modulacji szlaku EGF. Obserwacja, że fosforylacja receptora endogennego była niewykrywalna u myszy typu dzikiego i transgenicznych w warunkach podstawowych, może wyjaśnić prawidłowy fenotyp nerek pod względem morfologii i funkcji u myszy transgenicznych nieoperowanych. Niemniej jednak, te wyniki przemawiają przeciwko idei, że sygnalizacja EGF-R odgrywa główną rolę w modulacji transportu soletycznego w warunkach fizjologicznych (45). W naszym badaniu selektywna ekspresja transgenu w kanalikach proksymalnych nerki nie wpłynęła na rozwój nerki. Odkrycia te najwyraźniej kontrastują z obserwacją, że inaktywacja EGF-R przez rekombinację homologiczną spowodowała trzy różne fenotypy, od śmiertelności około-implantacyjnej do poporodowej letalności, lub defektów wszystkich narządów podlegających morfogenezie rozgałęzień, w tym nerki (27. 29). [patrz też: crt kardiologia, badanie elektrofizjologiczne, leki na wątrobę bez recepty ] [podobne: ciasta bezglutenowe przepisy, peeling kawitacyjny przeciwwskazania, leki na wątrobę bez recepty ]