Skip to content

Ukierunkowana ekspresja dominującego negatywnego EGF-R w nerkach zmniejsza uszkodzenia kanalikowo-śródmiąższowe po uszkodzeniu nerek ad 6

2 miesiące ago

163 words

Następnym krokiem była ocena skutków hamowania szlaku EGF w rozwoju zmian nerek w dwóch modelach uszkodzenia nerek: subtotalnej nefrektomii i przedłużonego niedokrwienia nerek. Naczelna nefrektomia (Nx). U zwierząt dzikich Nx powodował znaczące zmiany rurkowe, które były widoczne w 8 miesięcy po operacji (Figura 3c). W tym czasie kanaliki wykazywały kropelki wchłaniania białka, odlewy białkowe i ogniskowe. Proksymalne kanalikowe komórki nabłonkowe pojawiły się przerośnięte ze zmniejszonym współczynnikiem jądrowo / cytoplazmatycznym i utratą mikrokosmków. Kłębuszki były przerośnięte i wykazywały zwiększoną ilość materiału dodatniego dla PAS. Zmiany te były stępione u myszy transgenicznych: pomimo redukcji nefronów, wielkość komórek kanalików wydawała się normalna, ich mikrokosmki były zachowane i nie obserwowano żadnych poszerzeń rurkowych (Figura 3d). Aby oszacować różnice między dwiema grupami myszy, oceniliśmy uszkodzone kanaliki: ekspresja EGF-RM znacząco zmniejszyła wynik rurkowatego rozszerzenia (0,56. 0,16 vs. 1,15. 0,15, P <0,05). Ponieważ EGF jest silnym mitogenem dla komórek kanalików nerkowych (6, 7) i sugerowano zależność pomiędzy proliferacją komórek a zmianami kanalikowymi po redukcji nefronów (40), przeprowadzono barwienie immunologiczne PCNA na skrawkach nerki od zwierząt transgenicznych i dzikich. U myszy typu dzikiego liczba komórek kanarkowych dodatnich PCNA była nieco wyższa w pozostałych nerkach nefrektomijnych myszy, w porównaniu z zwierzętami pozorowanymi, 8 miesięcy po operacji (Tabela 2). Liczba komórek proliferujących była mniejsza, ale nie statystycznie inna, w pozostałych nerkach myszy transgenicznych niż w myszach typu dzikiego. Ponieważ wyniki te kontrastowały z morfologicznym aspektem kanalików i pozorną nadkomórkowością odcinków rurowych, następnie ocenialiśmy liczbę zarodków na odcinek rurowy, podawany wskaźnik hiperplazji (41). Jak pokazano w Tabeli 2, 8 miesięcy po zmniejszeniu liczby nefronów, liczba jąder na proksymalny odcinek rurowy u dzikich zwierząt nefrektomizowanych była trzykrotnie większa niż w przypadku dopasowanych wiekiem zwierząt pozorowanych. Ten przyrost był znacznie mniejszy w transgenicznych myszach nefrektomizowanych, w porównaniu z myszami typu dzikiego. Tabela 2 Proliferacja komórek w nerkach myszy typu dzikiego i transgenicznych 8 miesięcy po operacji Długotrwałe niedokrwienie nerek. U zwierząt dzikich, przedłużone niedokrwienie nerek (PRI) powodowało ciężką martwicę kanalików zlokalizowanych w połączeniu korowo-rdzeniowym i w korze głębokiej, po którym następowała intensywna proliferacja komórek cewek. Dwadzieścia osiem dni po niedokrwieniu, nerki po niedokrwieniu wykazywały liczne obszary kanalików atroficznych, zwłóknienie śródmiąższowe, a łagodna wieloogniskowa komórka jednojądrzasta infiltruje w pobliżu obszarów stosunkowo normalnie występujących kanalików (Figura 4c). U myszy transgenicznych ekspresja EGF-RM nie stępiła martwicy komórek kanalików po 50 minutach niedokrwienia, ale dramatycznie zmniejszyła rozwój zmian nerek. Rzeczywiście, 28 dni po operacji, w transgenicznych nerkach po niedokrwieniu, większość kanalików była normalna, podczas gdy pojawiły się tylko kilka obszarów śródmiąższowego zwłóknienia i nacieków komórek jednojądrzastych (Figura 4d). Aby oszacować korzystny efekt ekspresji transgenu, oceniliśmy obszary ze zmianami kanalikowo-śródmiąższowymi: wynik uszkodzonych obszarów zmniejszył się w transgenicznych nerek po niedokrwieniu, w porównaniu z nerkami typu dzikiego (1,63. 0,37 vs. 2,77. 0,15, p 0,05). Figura 4: Morfologia kontroli (aib) i nerek po niedokrwieniu (cid) u myszy typu dzikiego (a i c) i transgenicznych (b i d), 28 dni po niedokrwieniu. Długotrwałe atrofię cewek nerkowych, włóknienie śródmiąższowe i nacieki komórek jednojądrzastych (porównaj c do aib), które uległy redukcji w wyniku ekspresji transgenu (porównaj d do c). Barwienie trójchromem Massona, x 200. Aby uzyskać dalsze informacje na temat mechanizmów, dzięki którym dominujący negatywny mutant EGF-R chroni przed rozwojem zmian nerek po PRI, oceniliśmy wpływ ekspresji transgenu na szybkość proliferacji komórkowej i odkładanie kolagenu. U zwierząt dzikich liczba komórek znakowanych PCNA znacząco wzrosła po niedokrwieniu (Figura 5b). Aktywność proliferacyjna dotyczyła głównie kanalików proksymalnych. Jak pokazano na Fig. 6, przyrost był maksymalny w dniu 2 i pozostał wyższy niż w nerce nieoperowanej typu dzikiego w 28 dniu po operacji. U myszy transgenicznych liczba wyznakowanych PCNA komórek znakowanych PCNA była znacząco zmniejszona 2 i 4 dni po operacji (Figura 5c i Figura 6). Figura 5: Rozrost komórkowy i gromadzenie kolagenu w kontrolnych (a i d) i po niedokrwiennych nerkach (b, c, e, f) z myszy typu dzikiego (a, b, d, e) i transgenicznych (c i f) [więcej w: badanie elektrofizjologiczne serca, outlet szczecin godziny otwarcia, kalendarzyk miesiączkowy ob ] [patrz też: psychoterapia na czym polega, polskie towarzystwo ginekologiczne, nakładanie żelu na paznokcie ]