Skip to content

Transkrypcyjny czynnik pośredniczący 1 jest supresorem guza u myszy i u ludzi przewlekłej białaczki mielomonocytowej czesc 4

1 miesiąc ago

341 words

Analiza ST-HSC / MPP z traktowanej lub nieleczonej reprezentatywnej kontroli i Tif1g. /. myszy wykazywały wzrost MPP u myszy kontrolnych leczonych przeciwciałem, czego nie obserwowano w Tif1g (3/2). myszy. Delecja TIF1g wpływa na ekspresję Csf1r u myszy. Następnie sprawdziliśmy, czy Tif1. może regulować ekspresję Csflr (M-CSFR), Csf3r (G-CSFR) i Csf2ra (GM-CSFR), 3 geny, o których wiadomo, że uczestniczą w różnicowaniu monocytów lub granulocytów. W przeciwieństwie do Csf3r i Csf2ra, ekspresja Csf1r była znacznie zmniejszona przez brak Tif1. (Dodatkowa Figura 5, A i B), które mogą odpowiadać za zmienioną produkcję makrofagów otrzewnowych obserwowaną w Tif1g. /. myszy (dodatkowa Figura 5C). Te Tif1g. /. makrofagi nie przylegały do plastiku i były nieprawidłowo morfologicznie in vitro (Suplementalna Figura 5D). Poziomy M-CSF w osoczu (CSF-1) i G-CSF pozostały niezmienione w Tif1g. /. w porównaniu z myszami kontrolnymi (dodatkowa Figura 5E). TIF1G jest obniżony w podgrupie pacjentów z przewlekłą białaczką szpikową. CMML jest heterogenną chorobą w odniesieniu do nieprawidłowości molekularnych. Nasze dane myszy skłoniły nas do zbadania ekspresji TIF1. w monocytach krwi obwodowej posortowanych z kohorty 60 pacjentów z CMML (Tabela uzupełniająca 1). Transkrypt był prawie niewykrywalny u 21 z 60 pacjentów (35%) (ryc. 5A). Analiza immunocytochemiczna wykazała zmniejszenie ekspresji białka w monocytach i neutrofilach tych pacjentów (Figura 5B). Zmniejszona ekspresja w ekspresji Csf1r zidentyfikowana w Tif1g. /. komórki mysie (suplementowa figura 5) została potwierdzona w komórkach CMML, w których była silnie skorelowana z niskim poziomem TIF1G (r = 0,915) (Figura 5C). Rysunek 5 TIF1. jest zmniejszony u 35% pacjentów z CMML. (A) Analiza RQ-PCR TIF1. ekspresja w oczyszczonych monocytach (komórki CD14 +) zdrowych dawców (Ctrl) lub pacjentów CMML (podzestawy i 2). (B) Barwienie immunocytochemiczne dla TIF1. z monocytów, neutrofili i limfocytów (x 340) reprezentatywnej kontrolnej lub pacjenta CMML. (C) Korelacja ekspresji TIF1G i CSF1R w monocytach 17 osobników z CMML. Wykres rozrzutu pokazuje ekspresję mRNA TIF1G i CSF1R. Wartości wyrażenia są wyrażone w arbitralnych jednostkach. Pokazano krzywą regresji liniowej i współczynnik korelacji. * P <0,05. TIF1G jest epigenetycznie regulowanym genem supresorowym guza w przewlekłej białaczce mielomonocytowej. Sekwencjonowanie wszystkich eksonów TIF1G w monocytach z kohorty 66 pacjentów CMML (tabela uzupełniająca 2) z różnymi TIF1. Poziom mRNA i białka nie identyfikuje żadnej mutacji w sekwencji kodującej (dane nie pokazane). Analizowaliśmy przez bezpośrednie sekwencjonowanie zmodyfikowanej wodorosiarczynem sekwencji promotora TIF1G w CMML i monocytach dawcy zdrowia. Promotor TIF1G pacjentów z CMML wyrażających niskie poziomy TIF1. był metylowany, podczas gdy żaden DNA z normalnych monocytów ani próbka monocytów CMML z prawidłowym poziomem mRNA TIF1G nie wykazywała żadnej wykrywalnej metylacji (Figura 6A i Suplementowa Figura 6). Tak więc niska ekspresja TIF1. w komórkach CMML koreluje z hipermetylacją promotora TIF1G. Modyfikacje histonów, które są wysoce związane ze stanem epigenetycznym DNA, mogą być skorelowane z poziomami ekspresji genów (25). Zmniejszenie ekspresji genu TIF1G obserwowane w prawidłowych ludzkich monocytach po ekspozycji na M-CSF przez dzień korelowano ze specyficznym schematem modyfikacji histonów (acetylowania i metylowania) na promotorze genu TIF1G (Figura 6B). Podobny wzór, który sugeruje, że nieaktywna forma promotora była obserwowana w komórkach CMML o bardzo niskich poziomach TIF1a, podczas gdy te z normalnym TIF1. poziomy ekspresji wykazywały wzór podobny do aktywnej formy promotora obserwowany w nietraktowanych normalnych ludzkich monocytach (Figura 6B). Figura 6 TIF1G jest epigenetycznie regulowanym genem supresorowym guza w CMML. (A) Sekwencjonowanie sekwencji promotora TIF1G modyfikowanej wodorosiarczynem z normalnych monocytów (kontrola) lub monocytów CMML. (B) Analiza ChIP stanu modyfikacji histonów na promotorze TIF1G. Chromatynę poddano immunoprecypitacji, stosując specyficzne przeciwciała skierowane przeciwko modyfikacjom histonów. Ac, acetylowany; Me1, metylowany; Me3, trójmetylowany. 3-dniowa ekspozycja monocytów krwi obwodowej od pacjentów z CMML na decytabinę, środek demetylujący, który wykazał pewną skuteczność w leczeniu CMML (26), przywrócił ekspresję TIF1G w komórkach, w których poziomy były początkowo w dół regulowane (Figura 7A) . TIF1. ekspresja została również przywrócona w monocytach krwi obwodowej pacjenta CMML, który odpowiedział na decytabinę in vivo (Figura 7, B i C) [podobne: polskie towarzystwo ginekologiczne, crt p, peeling kawitacyjny przeciwwskazania ] [więcej w: nadpobudliwość psychoruchowa u dzieci, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy, maseczka z siemienia lnianego na włosy ]