Skip to content

Tlx działa jako przełącznik proangiogenny, regulując pozakomórkowy skład matryc fibronektyny w astrocytach siatkówki czesc 4

1 miesiąc ago

717 words

Szybka regulacja w dół VEGF, fibronektyny i Tlx oraz jednoczesna regulacja w górę ekspresji GFAP wydają się być raczej indukowalnymi niż zaprogramowanymi zdarzeniami wywołanymi przez powiązanie z naczyniami krwionośnymi. Istotnie, gdy inicjacja wzrostu naczyń siatkówki była opóźniona przez wstrzyknięcia śródoczne białka chimerycznego receptora VEGF, VEGF Trap (34), astrocyty kontynuowały ekspresję Tlx, VEGF i fibronektyny, wskazując, że te astrocyty pozostawały w stanie proangiogenicznym (Figura 3A ). Przeciwnie, ekspresja GFAP była ledwo wykrywalna, z wyjątkiem kilku astrocytów związanych z naczyniami krwionośnymi ograniczonymi do bezpośredniego sąsiedztwa nerwu wzrokowego (figura 3B). Zatem aktywności proangiogenne i ekspresja GFAP prawdopodobnie będą koordynowane w sposób skoordynowany przez zmiany mikrośrodowiskowe, którym towarzyszy tworzenie naczyń krwionośnych. Figura 3 Naczynia krwionośne wpływają na poziomy ekspresji genów proangiogennych i GFAP w astrocytach siatkówki. Siatkówki P3 48 godzin po iniekcji do gałki ocznej białka kontrolnego Fc (górne panele) lub pułapki VEGF (dolne panele). (A) Immunobarwione kolagenu typu IV i ISH dla Tlx, VEGF lub fibronektyny. W przypadku braku naczyń krwionośnych, geny specyficzne dla stanu proangiogennego są stale eksprymowane w astrocytach. (B) Immunobarwione dla PECAM-1 (zielony), GFAP (czerwony) i PDGFR. (niebieski). W siatkówkach traktowanych pułapką VEGF, GFAP ulega ekspresji jedynie wokół słabo rozwiniętych naczyń krwionośnych (strzałki). W przypadku braku naczyń krwionośnych, sieci astrocytów przedstawione przez PDGFR. wybarwienie utrzymuje proste tworzenie splotów charakterystyczne dla stanu proangiogennego. Powiększenie, × 126 (A), × 100 (B). Chociaż mechanizmy regulujące ekspresję Tlx i fibronektyny w astrocytach siatkówki pozostają do ustalenia, podobieństwo ich wzorców ekspresji do rozwoju do VEGF sugeruje, że stężenie tlenu może odgrywać ważną rolę. Aby zbadać tę możliwość, umieściliśmy szczeniaki P2 w 80% O2 na 5 godzin, a następnie przywrócono je do normalnego powietrza w pomieszczeniu (20% O2). Po 5-godzinnej ekspozycji na warunki hiperoksyczne, ekspresja mRNA Tlx w astrocytach siatkówki była znacznie tłumiona (Figura 4). Z drugiej strony, 18 godzin po powrocie do pomieszczenia, poziomy mRNA Tlx zostały całkowicie przywrócone. Podczas całego tego eksperymentu wzorzec ekspresji VEGF przypominał wzór Tlx. Tak więc, w astrocytach siatkówki wydaje się, że zarówno Tlx, jak i VEGF są kontrolowane transkrypcyjnie przez stężenia tlenu, co tłumaczyłoby ich synchroniczną ekspresję w proangiogennych astrocytach i regulację w dół po kontakcie z naczyniami krwionośnymi. Przeciwnie, mRNA fibronektyny ulegało ciągłej ekspresji nawet w warunkach hiperoksycznych, co wskazuje, że transkrypcja fibronektyny nie jest bezpośrednio regulowana przez stężenie tlenu. Pomimo szybkiego obniżenia poziomu Tlx w warunkach hiperoksycznych, ekspresja mRNA GFAP nie była znacząco podwyższona poza granice układu naczyniowego siatkówki (Figura 4), nawet gdy okres hiperoksji wydłużono do 24 godzin (dane nie przedstawione), co sugeruje, że ulga w Represja Tlx nie wystarcza do zwiększenia ekspresji GFAP. Figura 4 Koncentracja tlenu synchronicznie kontroluje ekspresję Tlx i VEGF, ale nie fibronektyny w astrocytach siatkówki. Immunobarwione kolagenu typu IV i ISH dla Tlx, VEGF, fibronektyny i GFAP. Poziomy ekspresji Tlx i mRNA VEGF są drastycznie obniżone w warunkach hiperoksycznych (górne panele), podczas gdy są one synchronicznie przywracane po powrocie do powietrza w pomieszczeniu (dolne panele). Przeciwnie, ekspresja fibronektyny jest utrzymywana w sposób ciągły nawet w warunkach hiperoksji. Ekspresja GFAP nie jest regulowana w górę poza obszarami unaczynionymi. Powiększenie, × 126. Całkowity brak angiogenezy siatkówki w Tlx. /. myszy. Aby zbadać funkcjonalne role Tlx w astrocytach siatkówki, szczególnie w stanie proangiogennym, przeanalizowaliśmy fenotypy histologiczne astrocytów siatkówki i naczyń krwionośnych myszy Tlx KO (Tlx A / p). Początkowe tworzenie prostego splotu astrocytów i następna przebudowa sieci astrocytów w siatkówkach myszy heterozygotycznych Tlx (Tlx + / y) była nieodróżnialna od myszy typu dzikiego. Natomiast w Tlx. /. myszy, promieniowe rozszerzenie astrocytów siatkówki było asymetryczne i znacznie opóźnione. Co więcej, promieniste sieci astrocytów nie miały bocznych odgałęzień i wzajemnych połączeń w Tlx. /. myszy, wyświetlając wygląd podobny do szprychy (Figura 5A). Ponieważ Tlx jest zaangażowany w kontrolę cyklu komórkowego (27, 29, 35, 36), przeprowadziliśmy testy inkorporacji BrdU w celu ustalenia, czy upośledzona aktywność mitotyczna w Tlx. /. astrocyty mogą wyjaśniać upośledzenie rozwoju sieci astrocytów siatkówki (ryc. 5B)
[podobne: crt kardiologia, maseczka z siemienia lnianego na włosy, ciasta bezglutenowe przepisy ]
[patrz też: peeling kawitacyjny przeciwwskazania, leki na wątrobę bez recepty, wiarygodny test internetu ]