Skip to content

Tlx działa jako przełącznik proangiogenny, regulując pozakomórkowy skład matryc fibronektyny w astrocytach siatkówki cd

3 miesiące ago

717 words

Rzeczywiście, komórki śródbłonka izolowane z siatkówek P7 również eksprymowały mRNA fibronektyny. Aby precyzyjnie zdefiniować wzór ekspresji fibronektyny w astrocytach siatkówki, przeprowadziliśmy hybrydyzację in situ (ISH) w siatkówce z kompletnym montażem w połączeniu z immunolabelingiem dla PDGFR. lub kolagen typu IV w celu zobrazowania odpowiednio astrocytów lub sieci naczyń krwionośnych. Podczas gdy astrocyty, które tworzą prosty splot w nie unaczynionych obszarach siatkówki silnie eksprymują fibronektynę, jej ekspresja uległa radykalnemu zmniejszeniu w wyniku kontaktu z naczyniami krwionośnymi (Figura 1G). Co ciekawe, ten wzór ekspresji fibronektyny był bardzo podobny do ekspresji VEGF (19, 22, 31, 32), ujawniając, że w stanie proangiogennym astrocyty siatkówki synchronicznie wyrażają te 2 geny. Tlx jest specyficznie wyrażany w proangiogennych astrocytach. Podczas gdy astrocyty siatkówki silnie wyrażają VEGF i fibronektynę w obszarach bez unaczynienia, doniesiono, że GFAP ulega ekspresji tylko na bardzo niskich poziomach w tych astrocytach, ale silnie wyrażana w astrocytach związanych z naczyniami krwionośnymi (22, 31). Wskazuje to, że ekspresja GFAP jest odwrotnie skorelowana z ekspresją proangiogennych cząsteczek, co sugeruje, że mechanizmy molekularne odpowiedzialne za regulację ekspresji GFAP mogą również być zaangażowane w regulację ekspresji proangiogennych cząsteczek w astrocytach siatkówki. Dlatego też zbadaliśmy regulację ekspresji GFAP w astrocytach siatkówki przy użyciu myszy transgenicznych, w których ekspresja GFP była napędzana przez 2,2 kb5. region promotorowy ludzkiego genu GFAP (33). Promotor GFAP o 2,2 kb był aktywny we wszystkich populacjach astrocytów we wczesnym okresie pourodzeniowym, co wykazano przez barwienie GFP (Figura 2A). Przeciwnie, ekspresja białka GFAP była wykrywalna tylko w astrocytach w pobliżu tarczy nerwu wzrokowego (Figura 2A), zgodna ze wzorem ekspresji mRNA GFAP w pełnych kończynach siatkówki (dane nie pokazane). Ta rozbieżność sugeruje, że ekspresja GFAP jest ujemnie regulowana w astrocytach siatkówki podczas wczesnych etapów poporodowych. Dobrą cząsteczką kandydującą pod tym względem jest sierocy receptor jądrowy Tlx, który, jak wykazano, tłumi ekspresję GFAP w nerwowych komórkach macierzystych (27). W rozwijającej się siatkówce stwierdziliśmy, że Tlx ulega przejściowej ekspresji w astrocytach podczas późnych etapów embrionalnych i wczesnych po urodzeniu (29). Aby określić dokładny wzór ekspresji genu Tlx i jego związek z GFAP w astrocytach siatkówki, wykonaliśmy ISH z całego miejsca w siatkówkach myszy z różnych stadiów rozwojowych (Figura 2B). W P0, gdy ekspresja endogennego GFAP była ledwo wykrywalna, Tlx był prawie równomiernie eksprymowany w astrocytach siatkówki. Jednak w trakcie rozwoju pourodzeniowego ekspresja Tlx w astrocytach spadła w centralnej siatkówce. Aby określić, czy przejście ekspresji Tlx w astrocytach siatkówki było ściśle skorelowane z procesem tworzenia naczyń krwionośnych, ocenialiśmy wzór ekspresji Tlx w połączeniu z barwieniem kolagenu typu IV lub PDGFR. (Figura 2C). Stwierdziliśmy, że podczas gdy Tlx był silnie eksprymowany w astrocytach w nie unaczynionych obszarach siatkówki, jego ekspresja była gwałtownie zmniejszona po kontakcie z naczyniami krwionośnymi. Ten wzór ekspresji Tlx w astrocytach był wyraźny w przeciwieństwie do GFAP (Figura 2C) i prawie identyczny z VEGF i fibronektyny (Figura 1G). W ten sposób zidentyfikowaliśmy Tlx jako jeden z genów specyficznie wyrażanych w proangiogennych astrocytach. Figura 2Tlx ekspresja w proangiogennych astrocytach. (A) Podwójne barwienie immunologiczne dla GFP i GFAP w siatkówkach myszy transgenicznych GFAP-GFP w P0 i P2. Podczas gdy promotor GFAP o 2,2 kb jest równomiernie aktywowany we wszystkich astrocytach, ekspresja GFAP jest widoczna tylko w astrocytach wokół dysków optycznych. (B) ISH całego miejsca dla Tlx w siatkówkach P0 i P2. Równomierna ekspresja Tlx w astrocytach siatkówki w P0 uległa sekwencyjnemu obniżeniu w sposób centralny do obwodowego. (C) ISH dla Tlx lub GFAP (czerwony) w połączeniu z barwieniem immunologicznym dla kolagenu typu IV (zielony) lub PDGFR. (żółty) na siatkówce P4. Dolne panele to powiększone widoki rosnących brzegów naczyń krwionośnych. MRNA Tlx ulega swoistej ekspresji w proangiogennych astrocytach i wykazuje wzór komplementarny do GFAP. Powiększenie, × 63 (A, B, i górny lewy i górny prawy panel C), × 252 (dolny i środkowy panel C). Ekspresja Tlx jest kontrolowana przez stężenie tlenu w astrocytach siatkówki. W rozwijającej siatkówce proangiogenne astrocyty charakteryzują się ekspresją wysokich poziomów VEGF, fibronektyny i Tlx oraz bardzo niskich poziomów GFAP
[więcej w: ciasta bezglutenowe przepisy, polskie towarzystwo ginekologiczne, crt d ]
[hasła pokrewne: polskie towarzystwo ginekologiczne, nakładanie żelu na paznokcie, ciasta bezglutenowe przepisy ]