Skip to content

Tlx działa jako przełącznik proangiogenny, regulując pozakomórkowy skład matryc fibronektyny w astrocytach siatkówki ad

3 miesiące ago

737 words

Podsumowując, dostępne dane wskazują, że Tlx może odgrywać ważną rolę w kontrolowaniu rozwoju astrocytów, chociaż niewiele wiadomo o mechanizmach regulujących ekspresję Tlx lub o specyficznej roli Tlx w regulowaniu funkcji astrocytów. W tym badaniu wykazano, że Tlx jest specyficznie wyrażany przez proangiogenne astrocyty siatkówki i ulega szybkiemu spadkowi w wyniku kontaktu z naczyniami krwionośnymi. Dramatyczna regulacja ekspresji Tlx jest kontrolowana przez stężenie tlenu. Nasze analizy zmutowanych myszy Tlx ujawniły, że Tlx odgrywa niezbędną rolę w tworzeniu proangiogennego pozakomórkowego rusztowania, które tworzy matrycę do wzrostu naczyń siatkówki poprzez regulację ekspresji i zewnątrzkomórkowego odkładania fibronektyny. Zatem Tlx reprezentuje nowego członka sieci komórkowej indukowalnej przez hipoksję wymaganej do ekspresji właściwości proangiogennych przez astrocyty siatkówki. Wyniki Tworzenie się rusztowań macierzy fibronektyny w proangiogennych astrocytach. Sugerowano, że macierze pozakomórkowe zdeponowane przez astrocyty tworzą proangiogenne rusztowanie, które odgrywa ważną rolę w rozwoju naczyń siatkówki (21). Jednakże mechanizmy regulujące tworzenie tego rusztowania i jego znaczenie funkcjonalne nie zostały jeszcze w pełni zdefiniowane. W niniejszym badaniu, najpierw zbadano odkładanie się fibronektyny i ekspresję jej receptora, integryny A5A1, na rosnącej krawędzi układu naczyniowego siatkówki. Podczas gdy matryce fibronektyny odkładały się wokół ekspresjonujących PDGFR p sieci astrocytów przed kiełkowymi komórkami śródbłonka, obie podjednostki integryny y5 i p1 były silnie eksprymowane w samych komórkach śródbłonka (Figura 1A). Takie komplementarne wzory ekspresji sugerowały, że integryna odgrywała kluczową rolę w promowaniu adhezji migrujących komórek śródbłonka do rusztowań fibronektyny. Dlatego też wstrzykiwaliśmy noworodkom P2 wewnątrz gałki ocznej monoklonalne przeciwciało przeciwko podjednostce integryny a w celu zahamowania jego wiązania z macierzami zewnątrzkomórkowymi, w tym fibronektyną (30). Dwadzieścia cztery godziny po wstrzyknięciu do gałki ocznej zatrzymano postępy w sieci naczyniowej i zmniejszono wydatność pędów śródbłonka na prowadzącej krawędzi układu siatkówki (ryc. 1B). Ponadto komórki śródbłonka nie były już ściśle związane z leżącą poniżej siecią astrocytów (Figura 1B), prowadząc do powiększenia i widocznej koalescencji kapilar siatkówki 48 godzin po traktowaniu (Figura 1C). Zatem adhezja zależna od integryny do szkieletu macierzy jest zasadniczą częścią rozwoju i morfogenezy układu naczyniowego siatkówki. Rycina 1. Wyznaczanie rusztowań macierzy fibronektyny w proangiogennych astrocytach. (A) Potrójne immunobarwienie (na górze) dla fibronektyny (FN, zielony), PECAM-1 (czerwony) i PDGFR. (niebieski) i podwójne barwienie immunologiczne (środkowe i dolne) dla lektyny (czerwone) i integryny a5 lub a1 (zielone) na kiełkujące naczyniowe krawędzie siatkówki P5. (B i C) Naczynia siatkówkowe 24 (B) lub 48 (C) godziny po wstrzyknięciu do gałki ocznej kontrolnego przeciwciała IgG (lewe) lub przeciwciała antyintegrynowego a (po prawej) w pozycji P2. (B) Immunobarwienie PECAM-1 (czerwony) i PDGFR. (zielony) przy kiełkujących brzegach naczyń krwionośnych. Strzałki wskazują komórki śródbłonka dysocjujące z rusztowań astrocytów (AC). (C) Barwienie PECAM-1. (D) Immunobarwione dla PDGFR. (czerwony) i fibronektyna (zielony) w siatkówce P7. Fibronektyna jest wyrażana wokół naczyń krwionośnych (grotów strzałek), ale prawie nieobecna w sieciach astrocytów, które nie są związane z naczyniami krwionośnymi (strzałki). (E) Przepływowa analiza cytometryczna komórek siatkówki z myszy transgenicznych Tie2-GFP w P7. Komórki śródbłonka i astrocyty sortowano odpowiednio jako frakcje GFP + (0,26%) i PDGFRy + (0,43%). (F) RT-PCR z całkowitego RNA komórek GFP + i PDGFR a + posortowanych według FACS. MRNA fibronektyny ulega ekspresji zarówno w komórkach śródbłonka, jak iw astrocytach. (G) Red immunobarwienie dla PDGFR. (po lewej), ISH dla fibronektyny (w środku) lub VEGF (po prawej) w siatkówkach P4. Groty strzałek wskazują rosnącą krawędź naczyń siatkówki przedstawioną przez immunobarwienie kolagenu typu IV (coll IV; zielony). Dolne panele to powiększone widoki rosnących brzegów naczyń krwionośnych. Powiększenie, × 200 (A i D), × 400 (B), × 70 (C), × 63 (G, górny), × 252 (G, dolny). W przebiegu normalnego rozwoju siatkówki fibronektyna pozostawała nadal w pobliżu naczyń krwionośnych, chociaż nie była już wyrażana w astrocytach (ryc. 1D). Wskazuje to, że produkcja fibronektyny związanej z naczyniami krwionośnymi może przechodzić od astrocytów do komórek śródbłonka i / lub muralu w procesach rozwoju naczyń siatkówki
[hasła pokrewne: leki na wątrobę bez recepty, wiarygodny test internetu, jak radzić sobie ze stresem w szkole ]
[patrz też: diukowie hazzardu cda, outlet szczecin godziny otwarcia, psychoterapia na czym polega ]