Skip to content

Tlx działa jako przełącznik proangiogenny, regulując pozakomórkowy skład matryc fibronektyny w astrocytach siatkówki ad 9

2 miesiące ago

404 words

Kontrolne wstrzyknięcia niespecyficznego chomiczego IgG lub ludzkiego fragmentu Fc IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories) podano do oczu przeciwnych. Sortowanie komórek i jednoetapowa analiza RT-PCR. Miseczki siatkówki od 7-dniowych myszy transgenicznych Tie2-GFP trawiono do pojedynczych komórek papainą i znakowano biotynylowanym anty-PDGFR. (APA5) (16) przeciwciało, a następnie sprzężona z allofikocyjaniną streptawidyna (Invitrogen Corp.). Po sortowaniu komórek przez BD FACSAria (BD Biosciences), całkowity RNA wyizolowano z 1000 posortowanych komórek przy użyciu zestawu RNeasy Micro Kit (QIAGEN), a jednoetapową RT-PCR przeprowadzono z zestawem OneStep RT-PCR (QIAGEN), stosując specyficzne startery ( Tie2, do przodu, 5a-TCTTGTGTCTGATGCCGAAAC-3a; Tie2, do tyłu, 5a-GCAGGTAGGAAGGACGCTTGT-3P, PDGFRa, do przodu, 5a-AATCCTGCAGACGAGAGCAC-3 (3, PDGFRa, do tyłu, 5a-GCCACCAAGGGAAAAGATTT-3a; fibronektyna, do przodu, 5 (3 -CTCCAGGCGTGGAATACACTTACACCATCC-3 (3, fibronektyna, rewersja, 5 (3-GATCAGCATGGACCACTTCTTCCAGAGAGG-3a, paktaktyna, napastnik, 5a -TCGTGCGTGACATCAAAGAG-3 (3 i p-aktyna, rewersja, 5a-TGGACAGTGAGGCCAAGATG- 3.). Wykrywanie proliferacji komórek. W przypadku testów inkorporacji BrdU, dootrzewnowe wstrzyknięcie BrdU (100 .g / g masy ciała) zostało podane noworodkom P5 na 2 godziny przed wyłuszczeniem, a siatkówki z całą masą zabarwione kozim anty-PDGFR. przeciwciało poliklonalne (R & D Systems), krótko utrwalone 4% paraformaldehydem, traktowane 2 N HCl zawierającym 0,1% Triton X-100 przez 60 minut w temperaturze 37 ° C, a następnie wybarwione biotynylowanym przeciwciałem monoklonalnym dla BrdU (klon PRB-1; Międzynarodowy). BrdU-dodatnie astrocyty siatkówki na krawędziach sieci rozlewających zostały policzone na stałym obszarze sfotografowanym przez obiektyw × 40. Pomiary te przeprowadzono w 4 losowych obszarach, a następnie uśredniono na siatkówkę. Dla każdej grupy leczenia analizowano 4 siatkówki od 4 młodych. Dane wyrażono jako średnie. SD i były statystycznie analizowane za pomocą dwustronnego testu ucznia. Podziękowania Dziękuję Jimowi Cohenowi i Marcusowi Fruttigerowi za hojne dostarczanie sond GFAP i Keiko Funa, Holger Gerhardt i Masanori Hirashima za krytyczne komentarze na temat manuskryptu. Jesteśmy wdzięczni Laboratorium Zasobów dla Zwierząt i Inżynierii Genetycznej w Centrum Biologii Rozwoju RIKEN za zakwaterowanie myszy. Prace te zostały wsparte dotacjami na badania naukowe w obszarach priorytetowych (12219209) oraz grantem wiodącego projektu na rzecz realizacji medycyny regeneracyjnej z Ministerstwa Edukacji, Kultury, Sportu, Nauki i Technologii Japonii. Przypisy Niestandardowe skróty: GFAP, kwaśne białko włókienkowe glejowe; HIF, czynnik indukujący hipoksję; ISH, hybrydyzacja in situ; Tlx, bezogonowy. Konflikt interesów: SJ Wiegand jest pracownikiem firmy Regeneron Pharmaceuticals Inc., która ma komercyjne zainteresowanie opracowaniem VEGF Trap jako leku.
[przypisy: crt kardiologia, maseczka z siemienia lnianego na włosy, jak radzić sobie ze stresem w szkole ]
[przypisy: przeciwwskazania do mikrodermabrazji, diukowie hazzardu cda, outlet szczecin godziny otwarcia ]