Skip to content

Stosowanie 3 ligandów TLR jako łączonego adiuwanta indukuje jakościowe zmiany w odpowiedziach komórek T potrzebne do ochrony antywirusowej u myszy czesc 4

2 miesiące ago

646 words

Specyficzna liza komórek docelowych pulsowanych umiarkowanym lub niskim stężeniem peptydów u myszy immunizowanych potrójną kombinacją była prawie równa, podczas gdy u myszy immunizowanych MALP2 + poli (I: C), cele z umiarkowanym poziomem peptydu były mniejsze. skutecznie lizowane i prawie nie było lizy, jeśli poziom peptydów był jeszcze niższy (wykres 2D). Aby potwierdzić, że aktywowane komórki T były w stanie zabić cele zakażone wirusem, limfocyty śledzionowe izolowane od myszy odpornościowych ponownie stymulowano 0,01. M P18-I10 przez 5 dni, a następnie hodowano in vitro z komórkami P815 zakażonymi vPE-16 przez 4 godziny. Splenocyty u myszy immunizowanych kombinowaną potrójnie-TLRa wykazały wyższą aktywność cytotoksyczną ex vivo na komórkach zakażonych wirusem niż u myszy immunizowanych podwójnie kombinacją (ryc. 2E). Tak więc, komórki T CD8 + o wyższej aktywności cytotoksycznej są również indukowane po szczepieniu kombinacją potrójnego TLR. Jest to zgodne z wcześniejszymi obserwacjami, że wyższe komórki zachłanności są bardziej skuteczne w usuwaniu infekcji wirusowych za pomocą kilku mechanizmów (14, 15). Potrójna kombinacja ligandów TLR wzmaga ekspresję IL-15 przez DC. Wykazano, że IL-15 w czasie primingu jest skuteczna w indukowaniu komórek T CD8 + o wysokim funkcjonalnym zachłanności (16). Aby określić, czy większa produkcja IL-15 może odpowiadać za zwiększoną zachłanność indukowaną przez potrójną kombinację, zmierzono wytwarzanie IL-15 z DC, stosując odprowadzanie LN DC bramkowanych dla ekspresji CD11c i MHC klasy IIhi 2 dni po wstrzyknięciu łapy z ligandami TLR. Potrójny ligand powodował znaczny wzrost powierzchniowej ekspresji IL-15 (tj. IL-15 prezentowany w trans na jego receptorze, IL-15Ra) na odzyskanych LN DC, podczas gdy ani podwójna kombinacja nie była zdolna do wzmocnienia IL-15 w porównaniu z brakiem leczenia ligandem (Figura 3A). Ta znaczna regulacja IL-15 była wynikiem współpracy wszystkich 3 różnych ligandów, a nie zwiększonej ilości całkowitych cząsteczek ligandu TLR, ponieważ zastąpienie ODN CpG dodatkową dawką MALP2 nie wykazało podobnej aktywności (dane nie pokazane). Ponadto, zwiększona ekspresja powierzchniowa IL-15 nie była spowodowana wyższym poziomem IL-15R. dostępność, ponieważ potrójna kombinacja nie zwiększała jeszcze podwyższonego poziomu receptora wywołanego podwójną kombinacją (Figura 3B). Figura 3 Wytwarzanie IL-15 przez DC wzmacniane jest przez ligandy TLR w potrójnej kombinacji. Myszy immunizowano sc w poduszce, jak na Figurze 2. W 2 dni, podkolanowe komórki LN odzyskano w celu barwienia powierzchni IL-15 (surfowanie IL-15) (A) i IL-15Ra. ekspresja (B) i analizowana w oparciu o MHC IIhi i CD11c + (górne panele). Liczby w górnym panelu (A) wskazują procent podwójnie dodatnich DC (z bramki bez limfocytów) z całkowitej liczby odzyskanych komórek LN. Wyniki reprezentują z 3 niezależnych eksperymentów o podobnych wynikach. TLR wykorzystują różne wewnątrzkomórkowe szlaki do transdukcji sygnału. Zarówno sygnał TLR2, jak i TLR9 przez MyD88, natomiast sygnały TLR3 niezależnie od MyD88. Ponadto, przekazywanie sygnału TLR2 jest związane z białkiem adaptorowym domeny TIR zawierającym (TIRAP, znanym również jako Mal), który pośredniczy w niezależnym od MyD88 szlaku sygnałowym. W ten sposób zbadaliśmy, czy TIRAP przyczynia się do ekspresji IL-15 przez DC stymulowane triple-TLR. TIRAP. /. DC miały zaburzoną ekspresję IL-15 po stymulacji kombinacją potrójnego TLR (Figura 4A), chociaż IL-15R. poziomy nie uległy zmianie (Figura 4B), co sugeruje, że TIRAP jest niezbędny do zwiększenia prezentacji IL-15 przez kombinatoryczną stymulację przez ligandy TLR. Figura 4 Udoskonalona ekspresja IL-15 kombinacji potrójnego TLR jest związana z TIRAP i zwiększoną ekspresją IL-15R3. BM-DC traktowano ligandami TLR w różnych kombinacjach przez 20 godzin i mierzono dla IL-15 i IL-15Ra. produkcja przez MHC klasy IIhi i CD11c + DC. (A i B) Barwienie powierzchniowe IL-15 (A) i IL-15R. (B) na DC z Tirap. /. myszy w porównaniu z WT. Liczby wskazują procenty dodatnich DC dla powierzchniowej IL-15. (C) Powierzchniowe zabarwienie IL-15 i IL-15. na Ifnar1. /. DCs a WT DC. (D) Barwienie wewnątrzkomórkowej IL-15 (iIL-15) na DC WT. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001. Wyniki przedstawiono jako średnie. SEM. I odwrotnie, wykazano, że IFN typu I są wymagane w przypadku IL-15. ekspresja (17) i może zwiększać poziomy IL-15 przez DC (18). Tutaj stwierdziliśmy, że DC pochodzą od Ifnar1. /. myszy nie wyrażają IL-15. ani IL-15 po stymulacji ligandami TLR w kombinacji (Figura 4C), co sugeruje ważną rolę IFN-a i jego indukcja IL-15R. w ułatwianiu ekspresji IL-15 [hasła pokrewne: psychoterapia na czym polega, kalendarzyk miesiączkowy ob, leki na wątrobę bez recepty ] [podobne: crt kardiologia, badanie elektrofizjologiczne serca, kardiolog blog ]