Skip to content

Stosowanie 3 ligandów TLR jako łączonego adiuwanta indukuje jakościowe zmiany w odpowiedziach komórek T potrzebne do ochrony antywirusowej u myszy ad 5

1 miesiąc ago

274 words

W rzeczywistości, MALP2 i CpG razem indukują więcej wewnątrzkomórkowej IL-15, której poziom jest porównywalny z poziomem potrójnej kombinacji (Figura 4D). Warto zauważyć, w przeciwieństwie do innych podwójnych lub potrójnych kombinacji, MALP2 i CpG nie regulowały w górę IL-15R. (Figura 4, B i C). Zredukowana IL-15R. wyrażenie koreluje z niskim IFN-y produkcja z DC (dodatkowa Figura 4A), podczas gdy augmentacja IL-12 była ledwo upośledzona (dodatkowa Figura 4B). Potrójna kombinacja ligandów TLR przedłuża przetrwanie DC. IL-15 jako plejotropowa cytokina ma wielopłaszczyznowe funkcje, w tym polepszenie przeżycia DC (19, 20). W ten sposób zbadaliśmy, czy ligandy triple-TLR promują przeżycie DC i chronią DC przed śmiercią. BM-DC stymulowane ligandami TLR przez różne dni in vitro zostały wymienione. W dniu 5 liczba DC drastycznie spadła we wszystkich innych grupach z wyjątkiem grupy potrójnej kombinacji, w której zmiana liczby komórek była marginalna (Figura 5A). Warto zauważyć, że MALP2 + poli (I: C) indukował utratę komórek wcześniej (w dniu 3) niż inne grupy (Figura 5A) i wykazał wyraźnie regulowaną w górę aktywowaną kaspazę-3, która była na najwyższym poziomie w porównaniu z innymi grupami (Figura 5B). ). Przeciwnie, nie było prawie żadnej aktywacji kaspazy-3 w DC potraktowanych triple-ligandem a poziomy kaspazy-3 nie były nawet wyższe niż w DC nie traktowanych ligandami (Figura 5B). Figura 5 DC aktywowane ligandami potrójnego TLR mają przedłużone przeżycie i zmniejszają kaspazę-3. (A) BM-DC traktowano w trzech powtórzeniach ligandami TLR przez różne czasy, jak wskazano. Komórki wyliczono za pomocą wykluczenia błękitem trypanu. Gwiazdki wskazują na istotną różnicę w liczbie pozostałych DC między dniem 5 a dniem 3 lub dniem 2. ** P <0,01. Przedstawiono jeden reprezentatywny wynik z 3 podobnych eksperymentów. (B) Po 2 dniach traktowania ligandami TLR, kaspazę 3 barwiono w BM-DC. Liczby wskazują procent DC dodatnich dla kaspazy-3. ** P <0,02. Wyniki reprezentują z 2 niezależnych eksperymentów o podobnych wynikach i są przedstawione jako średnie. SEM. Kombinacja potrójnego TLR zmniejsza indukcję limfocytów T z ekspresją Foxp3. Doniesiono, że podczas stymulacji komórek T efektorowych swoistych wobec antygenu, Tregi można ekspandować w celu regulacji efektorowych komórek T (21, 22). Zbadaliśmy, czy kombinacje ligandów TLR zbadane powyżej również znacznie rozszerzyły Treg. BM-DC wstępnie traktowane ligandami TLR zastosowano do stymulacji oczyszczonych naiwnych limfocytów T. Po 24 godzinach, DC traktowane ligandem pojedynczego TLR były zdolne do zwiększenia liczby komórek T CD4 + eksprymujących p35-widełkowy p3 (w porównaniu z nie poddawanymi leczeniu kontrolnymi (Figura 6A). Dwie podwójne kombinacje, MALP2 + CpG i poli (I: C) + CpG, były słabsze do zwiększenia liczby limfocytów T Foxp3 + CD4 +, podczas gdy MALP2 + poli (I: C), jak również potrójna kombinacja prawie nie działały. Liczba limfocytów T Foxp3 + CD4 + spadła po 48 godzinach we wszystkich grupach, ale poziomy w grupie z potrójnym połączeniem były nadal najniższe. Dane sugerują, że potrójna kombinacja ligandów TLR może zapobiegać ekspansji komórek Foxp3 + Treg, a tym samym poprawić odpowiedzi limfocytów T. Figura 6 Potrójne TLR traktowane ligandem. 3 zapobiegają ekspansji komórek Treg i wykazują minimalną regulację w górę PD-L1. BM-DC traktowano ligandami TLR przez 20 godzin, i usunięto nadmiar ligandów TLR. (A i B) Świeżo izolowane syngeniczne śledzionowe komórki T hodowano wspólnie z traktowanymi DC ligandu TLR. Komórki Foxp3 + CD4 + oceniano odpowiednio na 24 godziny i 48 godzin. Liczby wskazują procent komórek T CD4 + dodatnich dla Foxp3. (B) BM-DC traktowano ligandami TLR przez 20 godzin i barwiono mAb anty-CD86 lub anty-PD-L1 w celu pomiaru poziomów cząsteczek kostymulujących. Eksperymenty powtórzono dwukrotnie z podobnymi wynikami. * P <0,05; ** P <0,01. Wyniki przedstawiono jako średnie. SEM. DC potraktowane za pomocą potrójnej kombinacji obniżają ekspresję zaprogramowanego śmierci. Ligand 1. DC mogą hamować odpowiedzi limfocytów T za pośrednictwem hamującej cząsteczki kostymulującej programowanej śmierć. Ligand (PD-L1). (23). Badaliśmy dalej różnice w ekspresji PD-L1 między podwójnym. i potrójne rekombinacje ligandu TLR. Podczas gdy nie było różnic w ekspresji CD86 między DC traktowanymi zarówno podwójną kombinacją MALP2 + poli (I: C), jak i potrójną MALP2 + poli (I: C) + CpG (Figura 6B), PD-L1 było znacząco podwyższone przez leczenie skojarzone podwójnie w przeciwieństwie do terapii potrójnej, która ledwo stymulowała PD-L1 (Figura 6B). Zatem, w porównaniu z podwójnymi kombinacjami, potrójna kombinacja również zapobiega ekspresji PD-L1 na DC. Dyskusja Zarówno badania na ludziach, jak i na zwierzętach wykazały, że indukcja odpowiedzi komórek T ma decydujące znaczenie w zwalczaniu wielu infekcji wirusowych (13, 24-29). [więcej w: ciekawe miejsca w czechach, jak radzić sobie ze stresem w szkole, kalendarzyk miesiączkowy ob ] [więcej w: badania elektrofizjologiczne, crt p, kalendarzyk miesiączkowy ob ]