Skip to content

Przedoperacyjny test diagnostyczny odróżniający łagodny od złośliwego raka tarczycy na podstawie ekspresji genów cd

2 miesiące ago

657 words

Geny przypuszczalnie Emu1, NID2, COL14A1 i receptor śródbłonkowy typu B ulegały ekspresji w około 60-80% FTC i nie były dyskryminujące między FTA i FTC. Wyniki RT-PCR z sześciu genów, które wydawały się rozróżniać między FTC i FTA, zestawiono na rycinie 1. Ryc. 1Relatywne poziomy ekspresji określone za pomocą ilościowego RT-PCR w 23 próbach FTA i FTC (czarne słupki) oraz w prawidłowych tkankach tarczycy (szare paski). Poziom transkryptu normalizowano do średniej rybosomalnego białka 8 i kompleksu t 1, które były jednakowo eksprymowane we wszystkich trzech tarczowych bibliotekach SAGE. Liczby 1-10 odpowiadają przypadkom FTA i 11. 23 do FTC opisanym w Tabeli 2. Analiza statystyczna wartości RT-PCR ujawniła, że ekspresja genów DDIT3, ARG2 i ITM1 była znacząco różna na poziomie 0,05, a ekspresja C1orf24 był istotny na poziomie 0.10. Ponadto przeanalizowaliśmy poziomy ekspresji wybranych genów w trzech dobrze scharakteryzowanych liniach komórek tarczycy z różnych typów guzów tarczycy (20. 22). Wszystkie transkrypty podwyższone w FTC (Tabela 1) ulegały ekspresji we wszystkich liniach komórkowych tarczycy. Sugerujemy, że ekspresja kandydatów na markery w czystych populacjach hodowanych komórek nowotworowych wskazuje, że ekspresja była spowodowana złośliwym składnikiem nowotworu. Odwrotnie, geny obniżone w bibliotece FTC były obecne na niższych poziomach lub nieobecne w liniach komórkowych (Figura 2). Figura 2 Ilościowe produkty RT-PCR z trzech genów o statystycznie istotnych różnicach ekspresji, pokazujące gruczolaka (A), FTC (C) i normalne tkanki tarczycy (N) i linie komórek raka tarczycy (CL). Geny DDIT3, ARG2 i ITM1 są wyrażane w większości FTC, linii komórkowej raka pęcherzykowego tarczycy (CL1), linii komórkowej raka brodawkowatego raka tarczycy (CL2) i niezróżnicowanej linii komórek raka tarczycy (CL3), ale nie w normalna tkanka i większość umów o wolnym handlu. Przypadek 6 (A6) wyrażał ARG2 i ITM1 i został błędnie zaklasyfikowany zgodnie z naszymi przewidywanymi genami. Jako kontrolę stosowano uniwersalny ludzki RNA odniesienia (UHR). Rybosomalne białko 8 zostało użyte jako gen kalibratora. Drabina DNA o wielkości 100 pz (M) jest pokazana na skrajnych lewych i dalekich ścieżkach. Wyniki przedstawiono w trzech powtórzeniach, a liczby odpowiadają przeanalizowanym przypadkom (tabela 2). Rozmiary produktów i warunki PCR opisano w Metodach i podsumowano w Tabeli dodatkowej 1. Kontrola negatywna (NC) składa się z mieszaniny PCR i starterów, ale bez matrycy. Immunohistochemia. W przypadku dwóch genów, DDIT3 i ARG2, przeciwciała były komercyjnie dostępne. Wykonano immunohistochemię na skrawkach zatopionych w parafinie w celu określenia ekspresji białka i ekspresji różnicowej w FTA (n = 32) i FTC (n = 27), a wyniki podsumowano w Tabeli 3 (szczegóły patrz Tabela dodatkowa 2). Barwienie dla ekspresji DDIT3 (przeciwciało GADD153) wykazało ekspresję umiarkowaną do mocnej (++ / +++) w 23 FTC (85,2%). Barwienie wykryto zarówno w jądrze, jak i cytoplazmie komórek nowotworowych pęcherzyka (Figura 3, Dł F). Sąsiednia nienowotworowa tkanka tarczycy nie barwiła się. Trzy z czterech FTC ujemnych pod względem barwienia DDIT3 zostały sklasyfikowane jako małoinwazyjne guzy pęcherzykowe, a jeden został sklasyfikowany jako umiarkowanie zróżnicowany. Nie obserwowano barwienia jądrowego i cytoplazmatycznego w komórkach nabłonka w 29 skrawkach z FTA (90,6%, Figura 3, A. C) i kontroli negatywnych pod względem IgG. Słabe lub umiarkowane zabarwienie dla DDIT3 stwierdzono w trzech umowach o wolnym handlu (9,4%). Dwóch z trzech zdiagnozowano gruczolaka Hürthle a (HCA), a jeden był nietypowym gruczolakiem (dane nie przedstawione). Figura 3Immunohistochemiczna analiza DDIT3 (A (3F) i ARG2 (G . L) w zatopionych w parafinie sekcjach FTA i FTC. FTC wykazywały silne brązowe barwienie immunologiczne dla DDIT3 (D. F) i ARG2 (J. L). Przeciwnie, FTA (A | C i G | I) nie wykazywały immunoreaktywności. Strzałki w D i F pokazują inwazję naczyniową w FTC i komórkach pęcherzykowych, które są dodatnie pod względem DDIT3. Strzałka w L pokazuje normalną tarczycową tkankę, która była ujemna dla ARG2, w sąsiedztwie obszaru guza, który był dodatni dla ARG2. Hematroksynę zastosowano jako jądrowy barwnik kontrastowy. Oryginalne powiększenie, x 100 dla AE E i G