Skip to content

Neurony dopaminergiczne wytwarzane z funkcji embrionalnych komórek macierzystych małpy w modelu naczelnych Parkinsona czesc 4

2 miesiące ago

710 words

Lee i in. Niedawno opisali 5-etapową metodę indukowania neuronów DA z komórek ES poprzez indukcję neuronalnych komórek progenitorowych z ciał embrioidalnych (20). Transplantacja indukowanych neuronów DA pochodzących z mysich komórek ES poprawia objawy neurologiczne u szczurów z zespołem przypominającym Parkinsona indukowanym przez traktowanie 6-hydroksydopaminą (6-OHDA) (21). Opisano również sposób indukowania neuronów DA w oparciu o SDIA wynikający z kojarzenia komórek ES na warstwie zrębu z zarodkami PA6. Za pomocą tego sposobu mysie komórki ES są kierowane do neuronalnego losu z neuronami DA z dodatnimi DH, stanowiącymi 30% wszystkich neuronów TuJ1-dodatnich (10). Co więcej, metoda ta dała podobne wyniki w przypadku komórek ES M. colcicularis (11). W tym badaniu wyprodukowaliśmy wysoce wzbogaconą populację proliferujących neuronalnych komórek progenitorowych pochodzących z potraktowanych SDIA małpich komórek ES. Ponadto, traktowanie tych komórek kombinacją FGF2 i FGF20 indukowało generowanie dużej populacji neuronów DA z progenitorowych komórek nerwowych pochodzących z komórek ES. Stosując małpy traktowane MPTP jako model naczelny dla PD, analizowaliśmy wpływ podawania neuronów DA generowanych z małpich komórek ES in vivo. Badania behawioralne i obrazowanie czynnościowe ujawniły, że przeszczepione komórki funkcjonowały jako neurony DA, łagodząc objawy wywołane przez MPTP. Podczas przygotowywania komórek, które można było szczepić, dokonaliśmy dwóch głównych modyfikacji w naszym wcześniej opublikowanym protokole (10, 22). Najpierw zainicjowaliśmy tworzenie się neurosfer, spodziewając się wzbogacenia neuronowych komórek progenitorowych. W dniu 14 odłączyliśmy komórki ES od warstwy odżywczej i wyhodowaliśmy je na niepowlekanych naczyniach. W tych warunkach komórki utworzyły pływające kule złożone z neuronalnych komórek prekursorowych. Ponieważ pożywka hodowlana bez surowicy była odpowiednia do wzrostu komórek nerwowych, wszelkie zanieczyszczające komórki nieneuronalne i PA6 prawdopodobnie zostały wyeliminowane w wyniku niskiej szybkości proliferacji i / lub przylegania do dna naczynia. Nasz poprzedni raport (22) wykazał, że po wszczepieniu do mózgu całkowicie dojrzałe neurony z dodatnim TH przetrwały mniej skutecznie niż prekursory neuronów DA indukowane przez SDIA, prawdopodobnie ze względu na ich podatność na stres mechaniczny. Wynik ten jest zgodny z faktem, że transplantacja tkanek śródmózgowia z embrionów wczesnej ciąży przechodzących neurogenezę neuronów DA spowodowała dobre przeżycie komórek TH-pozytywnych (1300. 18 000) i zwiększone stężenie dopaminy w jądrze ogoniastym małp leczonych MPTP, mając na uwadze, że skutki te nie są obserwowane, gdy transplantowane są tkanki śródmózgowia z późniejszych stadiów (23). Tak więc neuronalne komórki progenitorowe komórek ES kompetentne do generowania neuronów DA wydają się być bardziej odpowiednie do przeszczepu niż neurony DA dojrzewające in vitro. Kolejną istotną modyfikacją naszego poprzedniego protokołu jest zastosowanie leczenia FGF2 i FGF20 w celu zwiększenia wytwarzania neuronów DA. Odsetek neuronów TH-pozytywnych wytworzonych z neurosfery wynosił 5,4. 1,8% TuJ1, znacznie niższe niż uzyskane w wyniku hodowli na komórkach PA6 (35%, odnośnik 10). Ta rozbieżność wynika najprawdopodobniej z mechanicznego uszkodzenia spowodowanego przez odłączenie komórek lub nieodpowiednie warunki hodowli dla kulek. Aby zwiększyć liczbę neuronów DA różniących się od neurosfer, zbadaliśmy wpływ różnych dodatkowych czynników wzrostu. Kwas askorbinowy i Sonic hedgehog, które były stosowane w 5-etapowej metodzie (20), nie zwiększały udziału komórek TH-dodatnich (dane nie pokazane). W przeciwieństwie do tego, traktowanie FGF20 w połączeniu z FGF2 było zdolne do wydajnego zwiększania proporcji komórek TH-dodatnich. FGF20 jest wydzielanym białkiem, które jest preferencyjnie eksprymowane w istocie czarnej mózgu mózgu szczura (13). Profil ekspresji FGF20 różni się znacznie od profilu innych członków rodziny FGF, co sugeruje, że FGF20 odgrywa wyjątkową rolę w mózgu. Ponadto, rekombinowany FGF20 wzmaga przeżycie pierwotnych neuronów DA (13). Receptor FcF (3c, receptor, przez który FGF20 aktywuje szlak kinazy białkowej aktywowany mitogenem, jest także preferencyjnie wyrażany w istocie czarnej pars compacta (24). Nasze wyniki podnoszą możliwość, że FGF20 w połączeniu z FGF2 może wspierać przeżycie lub promować proliferację progenitorów neuronów DA, powodując wzbogacenie komórek progenitorowych DA w sferach. Mechanizm, dzięki któremu ta połączona stymulacja FGF2 i FGF20 ułatwia wytwarzanie neuronów DA pozostaje wyjaśniona. Wiadomo, że FGF2 i EGF odgrywają różne role w różnicowaniu prekursorów nerwowych
[hasła pokrewne: badanie elektrofizjologiczne, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy, crt p ]
[patrz też: badanie elektrofizjologiczne, crt d, crt kardiologia ]