Skip to content

Neurony dopaminergiczne wytwarzane z funkcji embrionalnych komórek macierzystych małpy w modelu naczelnych Parkinsona cd

1 miesiąc ago

439 words

Ekspresja tych markerów była bardziej obfita w komórkach traktowanych FGF2 i FGF20 niż w komórkach traktowanych FGF2 i EGF (Figura 3F). Ponadto, komórki traktowane FGF2 i FGF20 uwolniły 55,6. 19,9 pmola na 106 komórek dopaminy w odpowiedzi na wysokie bodźce depolaryzujące K +, jak zbadano za pomocą HPLC (n = 5, Figura 3G). Wyniki te wskazują, że małpie kule ES traktowane zarówno SDIA, jak i FGF2 i FGF20 wytwarzają znaczną liczbę funkcjonalnych neuronów DA in vitro. Transplantacja neuronów DA z progenitorów neuronowych pochodzących z ES. Aby określić, czy wyizolowane neurony z dodatnim wynikiem działania funkcji nerwowej działają w warunkach in vivo jako neurony DA, neurosfery pochodzące z komórki ES zostały wszczepione w skorupę małp z wywołanym MPTP PD. W tym modelu prymasowym PD podawano MPTP dożylnie Macaca fascicularis (małpy cynomolgus), dalej M. fascicularis, i ocenialiśmy ich zachowanie, oceniając objawy neurologiczne, takie jak ruchliwość i drżenie (Tabela 1). Tylko zwierzęta, które wykazywały stabilne pogorszenie w okresach dłuższych niż 12 tygodni, zostały użyte do transplantacji. Neurosfery pochodzące z komórek ES, użyte do szczepienia, przygotowano przez traktowanie SDIA przez 14 dni, a następnie FGF2 i FGF20 przez 7 dni, jak opisano powyżej. Korzystając z obrazów MRI uzyskanych dla każdej małpy, określiliśmy niezbędne współrzędne do stereotaktycznego przeszczepiania komórek (300 000. 600 000 komórek na stronę) do skorupy dwustronnej. Po iniekcji nieustannie analizowaliśmy zachowanie pooperacyjnych małp, oceniając wyniki neurologiczne. Zaobserwowaliśmy lekkie wyleczenie objawów behawioralnych nawet u zwierząt pozorowanych. Jednak w 10 tygodniu po transplantacji średnie wyniki małp z przeszczepionymi komórkami ES znacząco poprawiły się w porównaniu z poziomami obserwowanymi u osób pozornie operowanych (Fig. 4A, odpowiednio n = 6 i 4). W naszej ocenie objawów po transplantacji, poprawa postawy była najbardziej widoczną poprawą obserwowaną u małp z przeszczepionymi komórkami ES, zaobserwowano również znaczną poprawę ruchliwości. Nie było jednak żadnych znaczących zmian w ruchu sprawdzania głowy. Świadomość nie została zakłócona w żadnym zwierzęciu przedoperacyjnym, a pooperacyjnie nie zaobserwowano pogorszenia. Ponadto żadne z leczonych zwierząt nie rozwinęło dyskinezy. Pozytonowa tomografia emisyjna (PET) po 14 tygodniach od transplantacji wykazała wzrost wychwytu 18F-fluorodopy w skorupie zwierząt po przeszczepieniu komórek ES (Figura 4, B i C). Figura 4Funkcja neurosfer pochodzących z komórek ES w małpach traktowanych MPTP. Wyniki behawioralne (A) i badanie PET (B i C) przeszczepionych komórek ES (n = 6) i zwierząt pozorowanych (n = 4). (B) Średnie wartości Ki z całej skorupy. (C) Zwiększony wychwyt 18F-fluorodopy w skorupie przeszczepionych komórek ES. Wszystkie wartości są średnie. SD. * P <0,05. Tabela Oceny neurologiczne małp leczonych MPTP Po badaniu PET zwierzęta uśmiercono i poddano analizie immunohistochemicznej. Szczepione komórki, które znakowano za pomocą traktowania BrdU podczas hodowli kulkowej, wykryto w skorupie małp przeszczepionych z komórek ES (7996. 3300 komórek na stronę, Figura 5, A. C). Neurony DA wykryto za pomocą TH (Figura 5, B, C, E i F, odnośnik 11) lub transportera dopaminy (DAT) (Figura 5, H i I, odnośnik 17) barwienia. Średnio 2130. Przeżyło 645 komórek TH-pozytywnych z każdej strony. Podwójnie znakowana mikroskopia immunofluorescencyjna wykazała, że 65,5%. 4,3% i 50,3%. 6,1% komórek pozytywnych pod względem TH i DAT było immunoreaktywnych odpowiednio dla BrdU. Tak więc szacunkowa liczba podwójnie pozytywnych komórek TH / BrdU2 wynosiła 1395 na stronę, 17,4% całkowitej liczby komórek BrdU-dodatnich. W przeciwieństwie do tego, u małp operowanych pozornie w skorupie wykryto tylko kilka komórek z dodatnim TH i rozproszonych włókien. Nie zaobserwowano tworzenia się guza ani reaktywności wywołującej Ki-67a. Podobnie jak w przypadku innych fenotypów neuronalnych, komórki GABA-dodatnie wykryto w przeszczepie z nieco większą częstością niż komórki z dodatnim wynikiem testu TH, podczas gdy niewiele komórek serotoniny było obecnych (dane nie pokazane). Figura 5 Surowactwo neuronów DA pochodzących z komórek ES w prążkowiu. (AOC) Przeszczepione komórki (znakowane BrdU, zielone) przeżyły i zróżnicowały się w neurony DA (TH-dodatnie, czerwone) wzdłuż igły (połączony obraz C). Pasek skali: 500 .m. (D. I) Kolokalizacja (strzałki w F i I) BrdU (D, F, G i I, zielony) i TH (E i F, czerwony) lub DAT (H i I, czerwony) pokazuje, że pochodząca z przeszczepu komórki mają charakter dopaminergiczny. Pasek skali: 50 .m. Dyskusja Po wstępnej pracy Thomson et al. raportowanie metody ustalania komórek ES naczelnych (18), Suemori i in. (19) opracowali niedawno podobny system generowania M [przypisy: ciekawe miejsca w czechach, badania elektrofizjologiczne, wiarygodny test internetu ] [podobne: nadpobudliwość psychoruchowa u dzieci, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy, maseczka z siemienia lnianego na włosy ]