Skip to content

Degradacja histonowej deacetylazy i aktywacja MEF2 sprzyjają powstawaniu wolnych mięśni mięśniaków cd

1 miesiąc ago

780 words

Skład włókien typu płaszczowego Hdac5 + / AHdac9a /. myszy i Hdac4 + /. Hdac5. /. myszy były identyczne jak myszy WT (dane nie pokazane), podczas gdy Hdac4 + / A Hdac5 A / A Hdac9 + / A zmutowane myszy wykazywały wzrost wolnych włókien porównywalny do wzrostu u myszy podwójnie zmutowanych (Figura 2A), co sugeruje, że delecja dowolnej kombinacji 4 alleli Hdac4, -5 lub -9 skutkuje zwiększoną ekspresją genu wolnofalowego. Ryc. 2 Klasy II HDAC redundantnie regulują powolną, oksydacyjną ekspresję włókien. (A) Mięśnie Soleus z WT, Hdac5. /. (Hdac5 KO), Hdac9. /. (Hdac9 KO), Hdac4fl / y; Myo-Cre (Hdac4 SkM-KO), Hdac7fl / y; Myo-Cre (Hdac7 SkM-KO) i zmutowane myszy klasy IIAC HDAC analizowano przez barwienie metachromatyczną ATPazą. Włókna typu I ciemnoniebieskie. Włókna typu II plamują na niebiesko. Oryginalne powiększenie, × 10. Pasek skali: 100 .m. (B) Kwantyfikacja rozkładu typu włókien w oparciu o analizę typu włókien w A. (C) Transkrypty izoform MHC określono w mięśniach płaszczkowatych i PLA z myszy wskazanych genotypów za pomocą ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym. (D) Przeciwciało anty-FLAG M2 w analizie Western blot białek izolowanych z mięśni GP 4-tygodniowych myszy Myo-tTA / tet-HDAC5 traktowanych DOX lub 10 dni po usunięciu DOX. Tubulina służyła jako kontrola obciążenia. (E) Barwienie metachromatyczną ATPazą mięśni GP zebranych z siedzącego trybu WT, kontroli 4-tygodniowej (tet-HDAC5 [bez tTA]) i myszy 4-tygodniowej kontroli transgenicznej HDAC5 (Myo-tTA / tet-HDAC5). Oryginalne powiększenie, × 4. Pasek skali: 300 .m. Przerywane czerwone linie wyznaczają mięśnie brzuchatego łydki (GA) z PLA. Analiza ekspresji transkryptów kodujących poszczególne izoformy MHC ujawniła wzrost ekspresji genów oksydacyjnych (MHC typu I [MHC-I] i -IIa) w mięśniach płaszczkowatych i PLA Hdac5a / AHdac9a /. zmutowane myszy (Figura 2C) w porównaniu z Hdac5 + / AHdac9a /. lub Hdac5. /. Hdac9 + /. rodzą się z miotu. Wyniki te sugerują, że zmniejszenie ekspresji białek HDAC klasy II poniżej określonego progu powoduje wzrost wolnych i utleniających włókien. Wymuszona ekspresja HDAC5 blokuje przełączanie typu włókna. Trening ćwiczeń przekształca istniejące szybkie włókna na fenotyp oksydacyjny (5). Aby określić, czy HDAC typu II moduluje przełączanie typu włókien w odpowiedzi na ćwiczenia, skonstruowaliśmy indukowalny specyficzny dla mięśnia szkieletowego specyficzny system transgeniczny z użyciem promotora miogeniny / wzmacniacza MEF2 (Myo) do kierowania ekspresją transaktywatora tetracykliny (tTA) (Myo-tTA ), który działa w układzie trans aktywując transgen reagujący na tetracyklinę. W tym układzie transgen nie ulega ekspresji w obecności doksycykliny (DOX), ale jest indukowany po usunięciu leku. Aby zweryfikować przestrzenną ekspresję tTA u myszy transgenicznych Myo-tTA, wygenerowaliśmy myszy transgeniczne niosące gen reporterowy lacZ sklonowany za kasetą ekspresyjną reagującą na tetracyklinę (reagującą na tet) (tet-lacZ). Gdy myszy transgeniczne Myo-tTA zostały skrzyżowane z myszami-reporterami tet-lacZ pod nieobecność DOX, ekspresję lacZ obserwowano specyficznie w mięśniach szkieletowych bez preferencji dla dorosłych włókien wolnych lub szybkich (dane nie pokazane). Myszy transgeniczne Myo-tTA były hodowane do myszy odpowiadających niosących transgen reagujący na tet kodujący oporne na sygnał FLAG ludzkie zmutowane białko HDAC5 (HDAC5S / A) (23). Ekspresję białka HDAC5 znakowanego FLAG wykryto za pomocą analizy Western blot z przeciwciałem anty-FLAG, stosując całkowite ekstrakty białkowe z mięśni brzuchatego łydki i PLA (GP) 4-tygodniowych myszy transgenicznych tet-HDAC5 / Myo-tTA, które miały DOX usunięto 10 dni wcześniej (rysunek 2D). Nadekspresję HDAC5 w myszach transgenicznych potwierdzono przez sondowanie przeciwciałem HDAC5 (Figura 2D). FLAG-HDAC5 nie został wykryty w obecności DOX (rysunek 2D). Aby przeanalizować wpływ HDAC5 na przełączanie typu włókna, DOX usunięto z 6-tygodniowych myszy transgenicznych tet-HDAC5 / Myo-tTA, i myszy te miały swobodny dostęp do koła do biegania przez 4 tygodnie, raz okres pokazany poprzednio, aby umożliwić przekształcenie szybkich włókien glikolitycznych w włókna utleniające (12). Transgeniczne myszy i myszy kontrolne Tet-HDAC5 / Myo-tTA działały dobrowolnie w porównywalnych stężeniach (dodatkowa Figura 3, A i B). Metachromatyczne barwienie mięśni szkieletowych ATPazy wykazało wyraźny wzrost włókien typu I i IIa w mięśniach GP ćwiczonych myszy tet-HDAC5 (bez tTA) w porównaniu z nietraktowanymi myszami (Figura 2E). Przeciwnie, mięśnie GP z ćwiczonych transgenicznych myszy tet-HDAC5 / Myo-tTA bez DOX nie wykazywały wzrostu włókien typu I i typu IIa w porównaniu z siedzącymi myszami (Figura 2E)
[patrz też: maseczka z siemienia lnianego na włosy, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy, nadpobudliwość psychoruchowa u dzieci ]
[więcej w: ciasta bezglutenowe przepisy, peeling kawitacyjny przeciwwskazania, leki na wątrobę bez recepty ]