Skip to content

Degradacja histonowej deacetylazy i aktywacja MEF2 sprzyjają powstawaniu wolnych mięśni mięśniaków ad 9

1 miesiąc ago

233 words

Wszystkie eksperymenty z udziałem zwierząt zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez Komitet Doradczy ds. Opieki nad zwierzętami i badań w Centrum Medycznym Uniwersytetu Teksańskiego w Southwestern. Izolacja i analiza RNA. Całkowity RNA został przygotowany z mysich tkanek przy użyciu TRIzolu (Invitrogen) zgodnie z instrukcjami producenta. Z całkowitego RNA, 1,5 ug przekształcono w cDNA z użyciem startera oligo dT i odwrotnej transkryptazy SuperScript II (Invitrogen). W przypadku reakcji PCR amplifikowano 2% puli cDNA. Cykle PCR zostały zoptymalizowane dla każdego zestawu starterów. Sekwencje dla starterów PCR HDAC zostały opisane wcześniej (46). Ilościowy PCR w czasie rzeczywistym przeprowadzono dla wskazanych izoform MHC przy użyciu SYBR Green (Applied Biosystems). Northern blot przeprowadzono z 20 .g całkowitego RNA na każdej ścieżce i sondowano w ULTRAhyb (Ambion) ze znakowanym cDNA HDAC4, -5 lub. -Actin. Analiza typu włókna i immunohistochemiczna. Mięśnie Soleus i GP zebrano od myszy i błyskawicznie zamrożono w podłożu do osadzania lub utrwalono w 4% paraformaldehydzie, jak opisano wcześniej (47). Analizę typu włókna z zastosowaniem barwienia metachromatyczną ATPazą (48) i barwienia srebrem z gradientem glicerolu przeprowadzono jak opisano wcześniej (47). Skrawki parafiny barwiono przeciwciałem MHC-1, a następnie traktowano DAB (Vector Laboratories). Statystyka. Dane są przedstawione jako średnie. SEM. Różnice między grupami badano pod względem istotności statystycznej przy użyciu niesparowanego dwustronnego testu dla ucznia. Wartości P <0,05 uznano za znaczące. Materiały uzupełniające Zobacz Dodatkowe dane Podziękowania Dziękujemy Andrew Williams, Yuri Kim, Dillon Phan, Bryan Young i Cheryl Nolen za pomoc techniczną oraz Alisha Tizenor za pomoc przy grafice. Prace te były wspierane przez granty z NIH, DW Reynolds Clinical Cardiovascular Research Center, Texas Advanced Technology Program, Stowarzyszenie Dystrofii Mięśni (do EN Olson) oraz Fundację Roberta A. Welcha. Przypisy Niestandardowe skróty: CaMK, kinaza białkowa zależna od wapnia / kalmoduliny; DOX, doksycyklina; EDL, extensor digitorum longus; GP, brzuchaty i plantaris; HDAC, deacetylaza histonowa; MEF2, czynnik wzmacniający miocytów 2; MHC, ciężki łańcuch miozyny; Myo, promotor miogeniny / wzmacniacz MEF2; Myo-Cre, rekombinaza Cre wytwarzająca Myo; Myo-MEF2C-VP16, Myo eksprymujące białko fuzyjne MEF2C-VP16; Myo-tTA, Myo wyrażające tTA; NLS, sygnał lokalizacji jądrowej; PGC-1 (3, receptor aktywowany przez proliferatory peroksysomów. coactivator-1 .; PLA, plantaris; Myszy SkM-KO, myszy z specyficznym nokautem mięśni szkieletowych; tet, reagujący na tetracyklinę; tTA, transaktywator tetracykliny; WV, biały vastus lateralis. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.117: 2459. 2467 (2007). doi: 10.1172 / JCI31960 Zobacz powiązane artykuły w wynikach produkcji NO w indukowanej zawiesiną atrofii mięśni poprzez dyslokację neuronalnych NOS, Dwie opowieści dotyczące mięśni szkieletowych i produkcji NO skutkują atrofią mięśni indukowaną przez zwichnięcie poprzez dyslokację neuronalnych NOS. [przypisy: crt kardiologia, jak radzić sobie ze stresem w szkole, kardiolog blog ] [przypisy: outlet szczecin godziny otwarcia, psychoterapia na czym polega, polskie towarzystwo ginekologiczne ]